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酶解BOB银杏种仁蛋白α葡萄糖苷酶抑制肽试验取得进展
作者:admin 发布日期:2022-10-04

BOB【摘要】 本研究以银杏籽为原料,研究了银杏降糖肽的制备工艺活性多肽产品,同时开发了具有降糖作用的功能性肽产品。最后通过动物实验验证了银杏的活性肽和功能肽。该产品在体内的降血糖活性为银杏多肽的综合利用提供了理论依据。主要研究成果如下:(1)α-葡萄糖苷酶抑制剂是一类可延缓肠道碳水化合物吸收的口服降糖药物,用于治疗糖尿病。它们可以竞争性地抑制位于小肠中的各种α-葡萄糖苷酶。减慢淀粉分解成葡萄糖,从而减缓肠道对葡萄糖的吸收,减少餐后高血糖。在以往的研究中,以α-葡萄糖苷酶的抑制率作为评价降血糖活性的指标。本研究在酶解银杏核蛋白制备α-葡萄糖苷酶抑制肽的实验中,首先以α-葡萄糖苷酶抑制率作为指标,比较5种商业蛋白酶的酶解效果,其中α-木瓜酶的葡萄糖苷酶 葡萄糖苷酶的最高抑制率为13.01%,木瓜蛋白酶被确定为最佳酶源。采用单因素检验和响应面法得出最佳酶解工艺为:银杏叶蛋白浓度为1.5%,pH值为7.36,酶底比为5 g/100 g,酶解温度57.9 ℃,酶解时间4.4 h。银杏蛋白酶水解物对α-葡萄糖苷酶的抑制率为17.09%。(2)为了获得活性更高的肽,首先将银杏粗肽超滤分成6个组分,其中3 k Da和3-10 k Da两种组分的α-葡萄糖苷酶抑制率较高分别为50.43%和43.59%,表明小分子肽具有更高的活性。

随后,通过半制备高效液相色谱进一步分离纯化3 k Da和3-10 k Da两种组分,分别得到A1和A2、B1和B2四种组分。分子量分别为 927.80 Da、1063.80 Da、3107.00 Da 和 3129.60 Da。(3)研究表明,谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸等氨基酸与多肽的降血糖作用有关。本实验采用氨基酸自动分析仪对A1、A2、B1、B2四种成分的氨基酸进行分析。成分分析发现活性多肽产品,A1的主要氨基酸为胱氨酸(Cys)、谷氨酸(Glu)和天冬氨酸(Asp)活性多肽产品,A2的主要氨基酸为谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)和精氨酸(Arg),B1的主要氨基酸是缬氨酸(Val),蛋氨酸(Met)、胱氨酸(Cys)、酪氨酸(Tyr)、谷氨酸(Glu)和天冬氨酸(Asp),B2的主要氨基酸是谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)和精氨酸(Arg) . (4)利用前次试验得到的3kDa肽制备功能肽产品,以功能肽产品的口感、功效和稳定性为指标进行评价。通过单因素实验和响应面法优化得到功能性肽产品的最佳工艺如下:木糖醇的添加量为5%,柠檬酸的添加量为0.3%,甘氨酸的添加量为1.2%活性多肽产品,黄原胶的添加量胶和羧甲基纤维素钠的添加量分别为0.02%和0.04%(m/v)。B2的主要氨基酸是谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)和精氨酸(Arg)。(4)利用前次试验得到的3kDa肽制备功能肽产品,以功能肽产品的口感、功效和稳定性为指标进行评价。通过单因素实验和响应面法优化得到功能性肽产品的最佳工艺如下:木糖醇的添加量为5%,柠檬酸的添加量为0.3%,甘氨酸的添加量为1.2%,黄原胶的添加量胶和羧甲基纤维素钠的添加量分别为0.02%和0.04%(m/v)。B2的主要氨基酸是谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)和精氨酸(Arg)。(4)利用前次试验得到的3kDa肽制备功能肽产品,以功能肽产品的口感、功效和稳定性为指标进行评价。通过单因素实验和响应面法优化得到功能性肽产品的最佳工艺如下:木糖醇的添加量为5%,柠檬酸的添加量为0.3%,甘氨酸的添加量为1.2%,黄原胶的添加量胶和羧甲基纤维素钠的添加量分别为0.02%和0.04%(m/v)。以功能性多肽产品的功效和稳定性为指标。通过单因素实验和响应面法优化得到功能性肽产品的最佳工艺如下:木糖醇的添加量为5%,柠檬酸的添加量为0.3%,甘氨酸的添加量为1.2%,黄原胶的添加量胶和羧甲基纤维素钠的添加量分别为0.02%和0.04%(m/v)。以功能性多肽产品的功效和稳定性为指标。通过单因素实验和响应面法优化得到功能性肽产品的最佳工艺如下:木糖醇的添加量为5%,柠檬酸的添加量为0.3%,甘氨酸的添加量为1.2%,黄原胶的添加量胶和羧甲基纤维素钠的添加量分别为0.02%和0.04%(m/v)。

BOB(5)为验证银杏活性多肽及功能性多肽产物的体内降血糖活性,采用链脲佐菌素诱导小鼠模型进行30天喂养试验。内容确定。银杏活性多肽及功能性多肽产品对糖尿病小鼠体重减轻症状无影响;银杏活性多肽低、中、高剂量组和功能性多肽产物低、中、高剂量组的总降血糖率分别为68.66%和73.23%。、70.19%、69.80%、65.30%和65.56%,说明银杏活性多肽和功能性多肽产品均具有良好的降血糖作用;银杏活性多肽低、中、高剂量组及功能性多肽产品低,中、高剂量组甘油三酯胆固醇水平降低率分别为8.60%、12.74%、12.80%、12.32%、10.67%和12.27%活性多肽产品,总胆固醇水平降低率分别为6.73%、12.75%、22.47%、15.00 %、23.04% 和 26.96%。表明银杏活性多肽和功能性多肽产品能有效降低糖尿病小鼠体内甘油三酯和总胆固醇的含量。